400-998-5282
专注多肽 服务科研
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Ac-DEVD-AFC 是一种荧光底物 (λex=400 nm,λem=530 nm)。
编号：130310
CAS号：201608-14-2
单字母：Ac-DEVD-AFC
| 编号: | 130310 |
| 中文名称: | Caspase 3 (Apopain) Substrate 1f, fluorogenic (10765-05) |
| 英文名: | Caspase 3 (Apopain) Substrate 1f, fluorogenic (10765-05) |
| CAS号: | 201608-14-2 |
| 单字母: | Ac-DEVD-AFC |
| 三字母: | Ac N端乙酰化封端，一种常见的修饰方式，常用于模拟蛋白质中的肽片段。 -AspL-天冬氨酸：aspartic acid。系统命名为(2S)-氨基-丁二酸。是编码氨基酸，又是神经递质。符号：D，Asp。D-天冬氨酸存在于多种细菌的细胞壁和短杆菌肽A中。 -GluL-谷氨酸：glutamic acid。系统命名为(2S)-氨基-戊二酸。是编码氨基酸。符号：E，Glu。D-谷氨酸存在于多种细菌的细胞壁和某些细菌杆菌肽中。 -ValL-缬氨酸：valine。系统命名为(2S)-氨基-3-甲基丁酸。是编码氨基酸。是哺乳动物的必需氨基酸。符号：V，Val。在某些放线菌素如缬霉素中存在 D-缬氨酸。 -AspL-天冬氨酸：aspartic acid。系统命名为(2S)-氨基-丁二酸。是编码氨基酸，又是神经递质。符号：D，Asp。D-天冬氨酸存在于多种细菌的细胞壁和短杆菌肽A中。 -AFC7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC）是一种荧光染料，其激发波长为376纳米，发射波长为480纳米。 |
| 氨基酸个数: | 4 |
| 分子式: | C30H34O13N4F3 |
| 平均分子量: | 715.61 |
| 精确分子量: | 715.21 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | -3 |
| 平均亲水性: | 1.875 |
| 疏水性值: | -1.58 |
| 消光系数: | - |
| 标签: | AFC修饰肽 |
Ac-DEVD-AFC 是一种荧光底物 (λex=400 nm,λem=530 nm)。
Ac-DEVD-AFC is a fluorogenic substrate (λex=400 nm, λem=530 nm).
7-Amino-4-trifluoromethyl-coumarin (AFC) is fluorophor with an excitation at 376 nm ▉ and emission of 480 nm ▉.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1038/sj.cdd.4400928 | Nuclear localization of DEDD leads to caspase-6 activation through its death effector domain and inhibition of RNA polymerase I dependent transcription | 下载 |
| 10.1038/sj.cdd.4401247 | Inhibition of papain-like cysteine proteases and legumain by caspase-specific inhibitors: when reaction mechanism is more important than specificity | 下载 |
| 10.1074/jbc.M308347200 | Selective disruption of lysosomes in HeLa cells triggers apoptosis mediated by cleavage of Bid by multiple papain-like lysosomal cathepsins | 下载 |
| 10.1111/j.1365-3083.2011.02589.x | Lysosomal membrane permeabilization induces cell death in human mast cells | 下载 |
| 10.1074/jbc.M305110200 | Human caspase-7 activity and regulation by its N-terminal peptide | 下载 |
| 10.1038/sj.emboj.7600210 | Analysis of the composition, assembly kinetics and activity of native Apaf-1 apoptosomes | 下载 |
| 10.1002/dvdy.20124 | Activation of apoptosis and caspase-3 in zebrafish early gastrulae | 下载 |
| 10.1074/jbc.M410915200 | Molecular ordering of the caspase activation cascade initiated by the cytotoxic T lymphocyte/natural killer (CTL/NK) protease granzyme B | 下载 |
| 10.1016/j.febslet.2005.03.002 | Sensitization of stefin B-deficient thymocytes towards staurosporin-induced apoptosis is independent of cysteine cathepsins | 下载 |
| 10.2353/ajpath.2006.050323 | Anti-apoptotic function of gelsolin in fas antibody-induced liver failure in vivo | 下载 |
| 10.1016/j.neuro.2006.06.006 | Proteasome inhibitor MG-132 induces dopaminergic degeneration in cell culture and animal models | 下载 |
| 10.1016/j.febslet.2007.10.005 | Cysteine cathepsins are not involved in Fas/CD95 signalling in primary skin fibroblasts | 下载 |
| 10.1016/j.febslet.2007.12.002 | Similar toxicity of the oligomeric molten globule state and the prefibrillar oligomers | 下载 |
| 10.1016/j.ejphar.2008.11.008 | Azaphenylalanine-based serine protease inhibitors induce caspase-mediated apoptosis | 下载 |
| 10.1074/jbc.M807913200 | Nucleophosmin is cleaved and inactivated by the cytotoxic granule protease granzyme M during natural killer cell-mediated killing | 下载 |
| 10.1111/j.1365-2362.2009.02133.x | Keratin 18 provides resistance to Fas-mediated liver failure in mice | 下载 |
| 10.1016/j.bbapap.2009.04.011 | Cysteine cathepsins are not critical for TNF-alpha-induced cell death in T98G and U937 cells | 下载 |
| 10.1016/j.immuni.2009.05.007 | Suppression of interleukin-33 bioactivity through proteolysis by apoptotic caspases | 下载 |
| 10.1016/j.chembiol.2010.07.011 | Selective and sensitive monitoring of caspase-1 activity by a novel bioluminescent activity-based probe | 下载 |
| 10.1186/1479-5876-9-123 | Liver mitochondrial dysfunction is reverted by insulin-like growth factor II (IGF-II) in aging rats | 下载 |
| 10.1021/jm300881a | Synthesis and characterization of a novel prostate cancer-targeted phosphatidylinositol-3-kinase inhibitor prodrug | 下载 |
| 10.1371/journal.pone.0044694 | Viral cross-class serpin inhibits vascular inflammation and T lymphocyte fratricide; a study in rodent models in vivo and human cell lines in vitro | 下载 |
| 10.1016/j.bbamcr.2013.05.007 | N-terminally truncated forms of human cathepsin F accumulate in aggresome-like inclusions | 下载 |
| 10.1038/onc.2013.314 | Stefin B deficiency reduces tumor growth via sensitization of tumor cells to oxidative stress in a breast cancer model | 下载 |
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| 10.1016/j.mrgentox.2014.07.002 | Evaluation of potential antigenotoxic, cytotoxic and proapoptotic effects of the olive oil by-product "alperujo", hydroxytyrosol, tyrosol and verbascoside | 下载 |
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| 10.1016/j.lfs.2006.12.013 | Effect of testosterone on oxidative stress and cell damage induced by 3-nitropropionic acid in striatum of ovariectomized rats | 下载 |
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| 10.1016/j.cbi.2009.06.003 | N-acetylcysteine, coenzyme Q10 and superoxide dismutase mimetic prevent mitochondrial cell dysfunction and cell death induced by d-galactosamine in primary culture of human hepatocytes | 下载 |
| 10.1002/2211-5463.12044 | Production of biologically active IL-36 family cytokines through insertion of N-terminal caspase cleavage motifs | 下载 |
| 10.1016/j.neuropharm.2016.11.019 | Inhibition of cathepsin X reduces the strength of microglial-mediated neuroinflammation | 下载 |
多肽Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AFC的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.41g CTC Resin（如初始取代度约为0.43mmol/g）和0.73mmol Fmoc-Asp(OtBu)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入1.82mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Asp(OtBu)-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Asp(OtBu)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取1.82mmol Fmoc-Val-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入3.64mmol DIPEA，1.73mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Val-Asp(OtBu)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Val-Asp(OtBu)-CTC Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-CTC Resin
H2N-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-CTC Resin，结构如下：
5、乙酸酐反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入1.82mmol 乙酸酐到树脂中，再加入3.64mmol DIPEA、1.73mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-CTC Resin。 结构如下：
6、全保护切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液体积约为树脂体积的3倍。再次用DCM洗涤树脂2遍（去除残留DMF），后将配置好的溶液倒入到反应器中，反应30分钟。抽滤树脂，收集滤液（此时多肽已经从树脂上分离，存在于滤液中）。多肽序列为 Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-CTC Resin。 在滤液中添加DIEPA，调PH至7-8。用饱和NaHCO3洗涤滤液，分离出DCM层溶液。可适当旋蒸DCM层溶液，减少有机溶剂。再次加入1或2倍体积的乙酸乙酯，用稀HCl溶液调PH至微酸性，将多肽从DCM层萃取到乙酸乙酯层。用饱和NaCl洗涤2次乙酸乙酯层。用无水硫酸镁吸收乙酸乙酯层的水分。通过减压旋蒸，直接将乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶体状固体多肽，用于下一步C端反应。或通过减压旋蒸保留适量乙酸乙酯的溶液体积，加入冰乙醚析出 多肽，然后对多肽进行烘干操作即可用于下一步C端反应。Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-COOH的结构图如下。
7、7-氨基-4-三氟甲基香豆素反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入1.82mmol 7-氨基-4-三氟甲基香豆素到树脂中，再加入3.64mmol DIPEA、1.73mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到 Ac-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Val-Asp(OtBu)-AFC。 结构如下：
8、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AFC。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
9、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
10、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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