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专注多肽 服务科研
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FLAG肽是一种具有肠激酶切割位点的八个氨基酸的肽，是一种常用的亲水性和免疫原性融合标签，专门设计用于促进免疫亲和层析的快速纯化。
编号：133742
CAS号：98849-88-8
单字母：H2N-DYKDDDDK-OH
FLAG由8个氨基酸组成，可通过加入肠激酶处理去除该标签。
FLAG peptide是一个多肽（Asp-Ty-rLys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）由八个氨基酸组成，具有肠激酶切割位点，可用于抗体介导的重组蛋白识别和纯化。FLAG peptide是一种高酸性八肽，可以在N端融合到目标蛋白质上。作为一种非常亲水的肽，Flag-tag具有很高的表面可能性。在Ca2+存在下，可通过免疫亲和柱捕获标志融合蛋白，并在低浓度，中性pH和接近生理条件下用EDTA洗脱。
FLAG标签肽（FLAG tag Peptide）是一个含有肠激酶酶切位点的8肽（Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys），专门用于免疫亲和层析。FLAG标签肽融合系统主要用于蛋白鉴定与纯化。融合蛋白的洗脱主要通过两种方式：以钙离子依赖的方式，通过抗体介导的亲和层析（降低pH）；用合成的多肽进行竞争性洗脱。FLAG标签肽允许在非变性的条件下进行洗脱。
标签肽必须有以下特点：第一，标签部分不应该干扰与其连接的蛋白质的天然折叠构象。第二，标签肽序列应该是水溶性的，应该最大程度的暴露于蛋白表面，以便其容易与配体相互作用。它应该适于温和且便宜的亲和纯化过程。最后，标签肽必须容易去除，从而获得天然产物。由于标签肽的小尺寸，可以由单个合成的寡核苷酸进行编码。在抗原抗体相互作用中，芳香族氨基酸起到重要的作用。
标签肽序列中第三位置的赖氨酸引导一个六肽序列，它确保该标签序列的最大亲水性。该亲水序列显示了强抗原性，也采用了高暴露的蛋白三维构象。FLAG的另一个优点是可以用肠激酶处理去除这个标签，得到含有真正N末端的融合蛋白。FLAG标签可以与融合蛋白的N端或C端进行融合。然而，N端融合有几个优点。抑制ELISA实验表明，当第一个氨基酸的α-氨基游离时，抗-Flag抗体M1可以结合3-4个Flag。
FLAG肽是一种具有肠激酶切割位点的八个氨基酸的肽，是一种常用的亲水性和免疫原性融合标签，专门设计用于促进免疫亲和层析的快速纯化。
FLAG peptide, an eight amino acids peptide with an enterokinase-cleavage site, is a frequently applied hydrophilic and immunogenic fusion tag which was specifically designed to facilitate rapid purification by immunoaffinity chromatography.
FLAG tag Peptide is an 8-peptide (Asp-Tyr-lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys) containing an intestinal kinase restriction site. FLAG Tag peptide fusion system is used in immunoaffinity chromatography for protein identification and purification. FLAG tag Peptide label peptides allow elution under non-denatured conditions[1,6]. The FLAG tag Peptide can be fused to either the N- or C-terminus of a given fusion protein.
The FLAG tag Peptide marker peptide fusion system comprises a unique and widely useful technique for protein identification and purification. When covalently attached to a solid support, the anti-Flag M1 antibody can be used for the rapid purification of FLAG tag Peptide fusion proteins in a mild, calcium-dependent affinity chromatography procedure. FLAG tag Peptide fusion proteins are typically purified to homogeneity in a single step, starting from a crude cell homogenate or supernatant, without ever exposing the protein to conditions other than physiological saline at pH 7.2 (with calcium or EDTA). The entire purification process can be carried out within several hours[2-3].
The N-terminal FLAG tag Peptide fusion protein can be purified by agarose affinity gel[5]. A short-cut protein purification procedure, where mechanical cell disintegration and affinity purification by immobilization of the anti-Flag M1 antibody on magnetic glass beads are combined. The modified glass beads were added to yeast cells and mixed on a laboratory vortex mixer. The magnetic glass beads capture the target protein, while the yeast cells are disrupted. By making contact with a stationary magnet, the magnetic glass beads can very efficiently be separated from yeast cell debris. Chelating agents, such as EDTA, were capable of eluting the FLAG tag Peptide fusion proteins from the magnetic glass beads[4].
References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.
FLAG tag Peptide 是一种包含肠激酶限制性位点的 8 肽 (Asp-Tyr-lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys)。 FLAG Tag 肽融合系统用于免疫亲和层析，用于蛋白质鉴定和纯化。 FLAG 标签肽标签肽允许在非变性条件下洗脱[1,6]。 FLAG 标签肽可以融合到给定融合蛋白的 N 端或 C 端。
FLAG 标签肽标记肽融合系统包含一种独特且广泛有用的蛋白质鉴定和纯化技术。当共价连接到固体支持物上时，抗 Flag M1 抗体可用于在温和的钙依赖性亲和层析过程中快速纯化 FLAG 标签肽融合蛋白。 FLAG 标签肽融合蛋白通常从粗细胞匀浆或上清液开始一步纯化至均质，除了 pH 7.2 的生理盐水（含钙或 EDTA）外，从未将蛋白质暴露于其他条件。整个纯化过程可在数小时内完成[2-3]。
N-terminal FLAG tag Peptide融合蛋白可以通过琼脂糖亲和凝胶纯化[5]。一种快捷的蛋白质纯化程序，其中结合了机械细胞分解和通过将抗 Flag M1 抗体固定在磁性玻璃珠上进行的亲和纯化。将改性玻璃珠添加到酵母细胞中并在实验室涡旋混合器上混合。磁性玻璃珠捕获目标蛋白，同时破坏酵母细胞。通过与固定磁铁接触，磁性玻璃珠可以非常有效地与酵母细胞碎片分离。 EDTA 等螯合剂能够从磁性玻璃珠上洗脱 FLAG 标签肽融合蛋白[4]。
FLAG peptide
专肽生物可以提供常见抗体制备、免疫学研究等生物科研需求的各类标签多肽（Tag peptide）以及蛋白底物产品，可用荧光标记(FITC、5-Fam)等。除常见抗体中抗原决定部位的标签多肽（tag: His | c-Myc | HA | FLAG | V5 | X-press | VSV tag | T7 tag | Snoop tag | E-tag | Sof tag 1 | Spy tag |等等），我们还提供各类定制标签肽的合成，并可提供荧光标记(FITC、5-Fam)等。同时，免费提供的MS和HPLC分析报告。
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1016/s0168-1656(00)00355-2 | Protein expression in yeast; comparison of two expression strategies regarding protein maturation | 下载 |
| 10.1016/s0165-022x(01)00213-5 | The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins | 下载 |
