AF-2, KHEYLRF-amide, was isolated from a head extract of the nematode, Ascaris suum. The peptide produced multiple effects on muscle tension, markedly increasing the tension change associated with changes in muscle membrane potential. It had mainly inhibi
编号：146159
CAS号：146269-94-5
单字母：H2N-KHEYLRF-CONH2
| 编号: | 146159 |
| 中文名称: | AF - 2, nematode |
| 英文名: | AF-2, nematode |
| CAS号: | 146269-94-5 |
| 单字母: | H2N-KHEYLRF-CONH2 |
| 三字母: | H2N N端氨基：N-terminal amino group。在肽或多肽链中含有游离a-氨基的氨基酸一端。在表示氨基酸序列时，通常将N端放在肽链的左边。 -LysL-赖氨酸：lysine。系统命名为(2S)-6-二氨基已酸。是编码氨基酸中的碱性氨基酸，哺乳动物的必需氨基酸。在蛋白质中的赖氨酸可以被修饰为多种形式的衍生物。符号：K，Lys。 -HisL-组氨酸：histidine。系统命名为(2S)-氨基-3-(4-咪唑基)丙酸。其侧链带有弱碱性的咪唑基，为编码氨基酸。是幼小哺乳动物的必需氨基酸。符号：H，His。 -GluL-谷氨酸：glutamic acid。系统命名为(2S)-氨基-戊二酸。是编码氨基酸。符号：E，Glu。D-谷氨酸存在于多种细菌的细胞壁和某些细菌杆菌肽中。 -TyrL-酪氨酸：tyrosine。系统命名为(2S)-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸。是编码氨基酸。符号：Y，Tyr。 -LeuL-亮氨酸：leucine。系统命名为(2S)-氨基-4-甲基戊酸。是编码氨基酸。是哺乳动物的必需氨基酸。符号：L，Leu。 -ArgL-精氨酸：arginine。系统命名为(2S)-氨基-5-胍基戊酸。在生理条件下带正电荷，为编码氨基酸。是幼小哺乳动物的必需氨基酸。符号：R，Arg。 -PheL-苯丙氨酸：phenylalanine。系统命名为(2S)-氨基-3-苯基丙酸。是编码氨基酸。是哺乳动物的必需氨基酸。符号：F，Phe。 -CONH2C端酰胺化 |
| 氨基酸个数: | 7 |
| 分子式: | C47H70N14O10 |
| 平均分子量: | 991.15 |
| 精确分子量: | 990.54 |
| 等电点(PI): | 11.71 |
| pH=7.0时的净电荷数: | 3.21 |
| 平均亲水性: | 0.11428571428571 |
| 疏水性值: | -1.34 |
| 外观与性状: | 白色粉末状固体 |
| 消光系数: | 1490 |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 纯度: | 95%、98% |
| 盐体系: | 可选TFA、HAc、HCl或其它 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 未分类肽 |
AF-2, KHEYLRF-amide, was isolated from a head extract of the nematode, Ascaris suum. The peptide produced multiple effects on muscle tension, markedly increasing the tension change associated with changes in muscle membrane potential. It had mainly inhibitory effects on Helix central neurones due to an increase in potassium conductance. KHEYLRF-amide has also been detected in Caenorhabditis elegans
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1016/0742-8413(92)90163-2 | An initial screen of a series of neuroactive peptides for activity on identified central neurones of Helix aspersa | 下载 |
| 10.1038/sj.bjp.0707296 | The nematode neuropeptide, AF2 (KHEYLRF-NH2), increases voltage-activated calcium currents in Ascaris suum muscle | 下载 |
| 10.1016/0196-9781(93)90127-3 | AF2, an Ascaris neuropeptide: isolation, sequence, and bioactivity | 下载 |
| 10.1006/bbrc.1995.2849 | Isolation of AF2 (KHEYLRFamide) from Caenorhabditis elegans: evidence for the presence of more than one FMRFamide-related peptide-encoding gene | 下载 |
多肽H2N-Lys-His-Glu-Tyr-Leu-Arg-Phe-NH2的合成步骤：
1、合成MBHA树脂：取若干克的MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：
2、脱Fmoc：取2.22g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取2.0mmol Fmoc-Phe-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入4.0mmol DIPEA，1.9mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Phe-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Tyr(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-His(Trt)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-His(Trt)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-His(Trt)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Lys(Boc)-His(Trt)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Phe-Linker-MBHA Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Lys-His-Glu-Tyr-Leu-Arg-Phe-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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